钙蓝素,AM是美国AAT Bioquest生产的细胞渗透性钙黄绿素，它是钙黄绿素的细胞渗透型。进入活细胞后，弱荧光钙黄绿素AM被水解成钙黄绿素，其激发/发射大值与DAPI，Hoechst和AMCA相似。与典型的绿色和红色荧光团（如FITC，TMR和德克萨斯红）的这种特殊光谱分离为多路复用实验提供了额外的选择。因为钙黄绿素AM本身是荧光的，所以可能需要适当的过滤器组和额外的洗涤步骤以使背景荧光小化。我们的钙测定缓冲液可用于有效洗涤细胞外钙黄绿素。
1. 百萤 钙蓝素AM 参数：
E x(nm) 354
E m(nm) 441
分 子 量 465.41
溶 剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存，避免光照
C A S 168482-84-6
2. 百萤 钙蓝素AM适用仪器
流式细胞仪
Ex: 350nm or 405nm
Em: 450/40 nm
通道: Pacific Blue通道
荧光显微镜
Ex: DAPI滤波片组
Em: DAPI滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
荧光酶标仪
Ex: 360nm
Em: 450 nm
Cutoff: 420nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式
3. 百萤 钙蓝素AM实验方案
操作步骤
（1）准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
（2）在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Calcein Blue，AM * CAS 168482-84-6 *储备液。
（2.1）卡介素蓝量，AM * CAS 168482-84-6 *使用量：1毫克
（2.2）所需浓度：2 mM
（2.3）在合适的容器中，将1mg钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *与1074.32μL无水DMSO混合。
（3）用含有10μM钙黄绿素的HHBS制备2X工作溶液，AM * CAS 168482-84-6 * 4，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
（3.1）Calcein Blue的终孔内浓度，AM * CAS 168482-84-6 *：5μM
（3.2）Pluronic®F-127的终孔内浓度：0.04％
（3.3）终孔内浓度的丙磺舒：1mM
（3.4）在合适的容器中混合16μL钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *，25.6μL10％Pluronic®F-127和256μL25mM Probenecid。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议终浓度为Calcein Blue，AM * CAS 168482-84-6 *为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
（4）将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
（4.1）此步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的终浓度调整为以下：5μM钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *，0.04％Pluronic®F-127,1 mM丙磺舒。
（5）孵育染料
（5.1）将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-60分钟。
（5.2）将染料加载板在室温下孵育30分钟。
（6）用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
（7）用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
（7.1）首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
（7.2）在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
（8）运行实验
（8.1）为您的样品添加所需的处理。
（8.2）以Ex / Em = 360/445 nm运行实验。
4.百萤 钙蓝素AM参考文献
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