TRIS-EDTA Antigen Retrieval Solution (50×) pH8.0
TRIS-EDTA抗原修复液(50×)pH8.0
产品简介:
EDTA抗原修复液是一种常用的抗原修复液,可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后,组织中的许多氨基酸残基形成醛键、羧甲键而封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联也使抗原决定簇隐蔽。导致免疫染色时染色信号减弱,甚至出现一些假阳性染色结果。因此,对于石蜡切片,要求在进行IHC染色前,先进行抗原修复,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,恢复抗原的原有空间形态。EDTA缓冲液是除柠檬酸缓冲液外另一种常用的IHC抗原修复液。有部分抗原用EDTA缓冲液修复效果好于柠檬酸缓冲液。特别是对于某些核抗原效果会更明显。
本抗原修复液采用了广泛使用的EDTA,可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。通常石蜡切片都需进行抗原修复处理,而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果,但对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善。特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时,可以考虑尝试进行抗原修复。从原理上来看,无论冰冻切片还是细胞爬片等,只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定的样品,进行抗原修复都会有效去除蛋白之间的交联,充分暴露抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。
本产品可以配制成5000ml抗原修复液(1×)。按照每个玻片需要10ml抗原修复液(1×)计算,本产品可用于500个样本的抗原修复。
使用方法(参考):
一.石蜡切片
A脱蜡:
(1)浸泡在二甲苯中3次,每次3~5min,每次更换新的二甲苯。
(2)无水乙醇脱水2次,每次3~5min。
(3)95%乙醇3-5min。
(4)90%乙醇3-5min。
(5)70%乙醇3-5min。
(6)馏水冲洗两次,每次3~5min。
B抗原修复:
(1)用去离子水或双蒸水稀释TRIS-EDTA抗原修复液(50×)至1×,例如1ml TRIS-EDTA抗原修复液(50×)加入49ml去离子水,混合均匀,即可得1× TRIS-EDTA抗原修复液。
(2)抗原修复液(1×)使用前需预热至95℃。
(3)将切片浸泡在抗原修复液(1×)中,95-100ºC加热约20分钟。
C冷却至室温后,免疫染色洗涤液洗涤1~2次,每次3~5分钟。
D进行封闭等后续的免疫染色步骤。
二.冰冻切片
(1)用去离子水或双蒸水稀释TRIS-EDTA抗原修复液(50×)至1×。
(2)免疫染色洗涤液洗涤切片3~5分钟。
(3)将切片浸泡在抗原修复液(1×)中,95℃或沸水加热约20分钟。
(4)抗原修复液(1×)使用前预热至95-100℃。
(5)冷却至室温后,免疫染色洗涤液洗涤1~2次,每次3~5分钟。
(6)进行封闭等后续的免疫染色步骤。
注意事项:
1、 浸泡在抗原修复液(1×)中,*佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行实验。
2、 如果使用微波炉加热,需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。
3、 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,
4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
4℃保存,有效期一年。