产品参数

产品名称：AF488 酪an（XFD488 tyramide reagent）

产品货号：11070

产品规格：200 slides

品    牌：AAT Bioquest\

储存条件：在零下15度以下保存, 避免光照

产品优势

1. 酪an信号放大（TSA）是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术,可以使检测有更高的灵敏度.

2. 免疫组织化学（IHC）应用，使传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。

3. 为了实现大的IHC检测，酪an用荧光团预标记。

4.AF488酪an含有明亮的AlexaFluor®488，可以使用标准FITC过滤器套件轻松检测.

产品概述

适用范围

  AF488酪an是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，适合标记抗体或蛋白。应用于细胞或组织。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供的AF488酪an。 

注意事项:该产品不能进行活体成像。

适用仪器

荧光显微镜  

Ex:     FITC滤波片组

Em： FITC滤波片组

推荐孔板: 黑色透明底板

滤波片: FITC滤波片组

实验方案
染色样品示例

概述

1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP偶联的二抗
4.准备酪an工作溶液，室温下在细胞或组织中5-10分钟



操作步骤

在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。


1.Tyramide原液（200X）：
将100μLDMSO加入小瓶中并充分混合。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存。

2.Tyramide工作溶液（1X）：
将100μLTyramide原液加入20 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。
注意：Tris Buffer，pH = 7.4可用于获得佳性能。
注意：Tyramide工作溶液应立即使用。
注意：20 mL溶液适用于200次测试。

3.细胞固定和透化
3.1在室温下用PBS中的3.7％甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1％Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用PBS冲洗细胞或组织两次。

4.过氧化物酶标记
4.1任选：通过在过氧化物酶猝灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性。 在室温下用PBS冲洗两次。
4.2可选：如果使用HRP偶联的链霉抗生物素蛋白，建议通过生物素阻断缓冲液阻断内源性生物素。
4.3用优选的封闭溶液（例如含有1％BSA的PBS）在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液，加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°C下过夜。
4.5用PBS洗涤三次，每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用PBS洗涤三次，每次5分钟。

5.Tyramide标记
5.1为每个样品准备并应用100μLTyramide工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，可以缩短Tyramide的孵育时间。 您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。 或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Tyramide。
5.2用PBS冲洗三次。

6.荧光成像
6.1根据需要对细胞或组织样本进行计数。 AAT提供了一系列细胞核复染试剂，如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
6.2使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
6.3使用适当的过滤器组可视化来自Tyramide标签的信号。