小鼠胚胎成纤维细胞MEF
小鼠胚胎成纤维细胞MEF种属鉴定安为生物
小鼠胚胎成纤维细胞MEF
MEF【MEF】
l细胞鉴定
种属鉴定已通过
l细胞来源
国家资源库
l细胞背景
取孕9天的615小鼠胚胎，去除脑、心脏等培养建立。该细胞可用作饲养层细胞，支持胚胎干细胞ES的生长并维持ES未分化的状态。当作为饲养层细胞时，MEF需经丝裂mei素C处理停止生长。建议作为ES细胞的饲养层时，MEF不要超过6代。
l细胞特性
1）来源：小鼠胚胎
2）形态：成纤维细胞样，贴壁生长
3）含量：>1x106细胞数
4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
5)用途：仅供科研使用
l培养条件
1）准备D/F12（推荐awcell-0005）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
l注意事项
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10�S的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
l运输形式
低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
常温:（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
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