产品名称:禽脑脊髓炎(AE)ELISA试剂盒
检测方法:酶联免疫法/酶免法(ELISA)
性状:液体
规格:96T/48T
产品用途:科研 实验
公司服务:ELISA试剂盒 免费代测
经营品牌:RD
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月
运输条件:低温运输,用干冰或者冰袋低温运输。
禽脑脊髓炎(AE)ELISA试剂盒操作问题:
试剂准备不当可能影响酶联免疫吸附测定ELISA结果
在实验室,对试剂准备一般不太注意,通常的做法是,在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
因此,在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是,在实验开始前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20min以上后,再进行测定,以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。其次,目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制,因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。
此外,当试剂盒以OPD为底物时,则底物溶液应在反应显色前临时配制。
禽脑脊髓炎(AE)ELISA试剂盒样品要求
客户需提供待检测抗体和包被用抗原。
测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆。
样本收集后应立即-20℃保存,若长期保存应-70℃。
样本量的要求:若一个指标做复孔检测应不少于250ul,做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足最好提供500ul以上。
客户的样本收集后,立即按要求保存,切忌反复冻融。外地客户邮寄需要用干冰运输。邮寄前请与技术支持沟通确认。
禽脑脊髓炎(AE)ELISA试剂盒回收率
elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L,则认为回收率为98%。
对于定量检测来说,主要还是一个准确度的验证。不过我看到别人写的内容比我自己想说的要好,所以就贴上去了。相对回收率可能会高于100%的,如果只是说“损失程度”,其实是不准确的。应该说,回收率越接近100%,说明这个试剂盒的准确度越高。
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Elisa酶要求
用于ELISA的酶应符合以下要求:纯度高,催化反应的转化率高,专一性强,性质稳定,来源丰富,价格不贵,制备成酶结合物后仍继续保留它的活性部分和催化能力。最好在受检标本中不存在相同的酶。另外,它的相应底物易于制备和保存,价格低廉,有色产物易于测定等。
在 ELISA 中,常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶(alkalinephosohatase, AP)。在少数商品ELISA 试剂中,应用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。
国产 ELISA 试剂一般都用HRP 制备结合物。HRP 是一种糖蛋白,含糖量约为18%,分子量为44000,是一种复合酶,由主酶( 酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成,是一种卟啉蛋白质。主酶无色糖蛋白在275nm 波长处有最高吸收峰,辅基是深棕色的含铁卟啉环,在403nm 波长处有最高吸收峰。HRP 的纯度用RZ(Reinheit Zahl,德文,意为纯度数)表示,是403nm 的吸光度与280nm 吸光度之比,高纯度的HRP的RZ≥?.0。
HRP 除符合上述的ELISA 中标记酶的要求外,更有价格低廉和性质较稳定的特点。值得注意的是,在选用酶制剂时,除其纯度RZ 外,更应注意酶的活力。高纯度的酶如保存不当,活力也会降低。酶制剂的活力以所含的酶活力单位表示,可用对底物作用后生成产物量的测定进行试验。
国外很多 ELISA 试剂采用碱性磷酸酶(AP)作为标记酶。常用的AP 有两个来源,分别从大肠杆菌和小牛肠膜中提取。不同来源的酶生化特性特性略不相同,从大肠杆菌中提取的 AP 分子量为80000,酶作用的最适合pH 为8.0;用小牛肠膜中提取的AP 分子量为10 0000,最适pH 为9.6。在ELISA 中,AP 系统的敏感度一般高于HRP 系统,空白值也较低,但AP 价格昂贵,制备结合物所得率也较 HRP 低。
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